Assessment of the Virulence of the Burkholderia mallei Strain BAC 86/19 in BALB/c Mice.

Burkholderia mallei is an aerobic, Gram-negative, non-motile bacillus. As an obligate mammalian pathogen, it primarily affects solipeds. Although rarely transmitted to humans, the disease it causes, glanders, is classified as a zoonosis. The bacterium was officially eradicated in Brazil in 1969; however, it reemerged after three decades. This study aims to assess the virulence of a specific B. mallei strain, isolated in Brazil, in BALB/c mice through intranasal infection. The strain, B. mallei BAC 86/19, was obtained from the tracheal secretion of a young mare displaying positive serology but no clinical signs of glanders. Post-mortem examinations revealed macroscopic lesions consistent with the disease, however. In mice, the LD50 was determined to be approximately 1.59 × 105 colony-forming units (CFU)/animal. Mice exposed to either 0.1 × LD50 or 1 × LD50 displayed transient weight loss, which resolved after three or five days, respectively. B. mallei persisted within the liver and lung for five days post-infection and in the spleen for seven days. These findings underscore the detectable virulence of the Brazilian B. mallei BAC 86/19 strain in mice, which are relatively resilient hosts. This research points to the importance of the continued investigation of the virulence mechanisms and potential countermeasures associated with B. mallei infections, including their Brazilian isolates.

Systematic monitoring of glanders-infected horses by complement fixation test, bacterial isolation, and PCR.

Glanders is an equine zoonosis caused by Burkholderia mallei that is responsible for considerable economic loss. Complement fixation testing (CFT) using warm or cold incubation are recommended by the OIE, but many routinely used detection tests may present misleading results. To increase accuracy of glanders diagnosis and establish an appropriate protocol in collaboration with the National Equine Health Program, seven horses positive for glanders kept in isolation in Brazil were examined fortnightly by CFT, microbiological screening, and molecular testing. Warm and cold serologies with USDA and c.c.Pro antigens, respectively, were performed on 132 samples using the US Department of Agriculture protocol. The warm and cold serologies showed, respectively,12.9% and 17.3% seroreactive, 85.7% and 65.2% non-reactive, 0.8% and 3% inconclusive, and 0% and 2.3% anticomplementary. The agreement of CFT protocols was moderate. Of 213 clinical samples submitted to selective culture (167 nasal swabs, 5 ocular swabs, 3 lymph node punctures, and 38 tissue samples from four horses that died), 1.9% tested positive for B. mallei. Fourteen samples and one nasal swab (7%) tested positive with PCR. Cold CFT with the USDA and c.c.Pro antigens, in combination with PCR to increase sensitivity, may be useful for diagnosis of chronic glanders.

Detection of virulence factors in coagulase-negative Staphylococcus spp. strains isolated from Emmental cheese / Detecção de fatores de virulência em cepas de Staphylococcus spp. coagulase negativos isoladas de queijo Emmental

Food prepared with products derived from animals are involved in most cases of staphylococcal poisoning; therefore, the research of Staphylococcus spp. in Emmental cheese is more applicable. The objective of this study was to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) in cheese using biochemical and molecular techniques to detect the presence of nine genes responsible for the production of enterotoxins. From 180 samples analyzed, 204 CNS strains were obtained and identified as being 46 (22.6%) S. saprophyticus strains, 27 (13.2%) S. hominis spp. hominis strains, 22 (10.8%) S. sciuri strains, 21 (10.3%) S. xylosus strains, 19 (9.3%) S. epidermidis strains, 19 (9.3%) S. haemolyticus strains, 17 (8.3%) S. lentus strains, 17 (8.3%) S. warneri strains, 11 (5.4%) S. equorum strains and 5 (2.5%) S. cohnni . Using the PCRm protocol, 14 (6.9%) strains with the presence of the genes on the enterotoxin E (SEE)11 (78.6%), J (SEJ) 1 (7%), C (SEC) 1 (7%) and I (SEI) 1 (7%) were detected. Based on the results, the type of package is not interfered of growth and isolated that Staphylococcus spp. in cheese. It was observed that bacteria capacity to produce coagulase cannot be understood as an indicative of enterotoxigenicity; therefore, the CNS should be considered as a target of importance in the epidemiology of staphylococcal intoxications. It can be concluded that CNS need to be included in bacterial foodborne disease research, since the genes responsible for the production of toxins were detected and none of the studied samples presented Staphylococcus spp. counting above the limits allowed by legislation.(AU)

Os alimentos preparados com produtos de origem animal são os mais envolvidos em casos de intoxicação alimentar estafilocócica; portanto a pesquisa do Staphylococcus spp. em queijos tipo Emmental é relevante. O objetivo foi isolar e identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativas (CNS)de queijo Emmental acondicionado em vários tipos de embalagem, por meio de técnicas bacteriológicas e bioquímicas e detectar, por PCR, a presença de nove genes responsáveis pela produção de enterotoxinas. Das 180 amostras, foram isoladas 204 cepas de CNS, que foram identificadas por provas bioquímicas como: 46 (22,6%) S. saprophyticus, 27 (13,2%) S. hominis spp. hominis, 22 (10,8%) S. sciuri, 21 (10,3%) S. xylosus, 19 (9,3%) S. epidermidis , 19 (9,3%) S. haemolyticus , 17 (8,3%) S. lentus , 17 (8,3%) S. warneri , 11(5,4%) S. equorum e 5 (2,5%) S. cohnii . Na PCR multiplex, em 14 (6,9%) isolados foi detectada a presença dos genes para enterotoxina E (SEE), em 11 (78,6%) J (SEJ), em 1 (7%) C (SEC) e em 1 (7%) I (SEI). Com base nos resultados, o tipo de embalagem não interferiu na multiplicação dos Staphylococcus spp. isolados dos queijos. Neste estudo, verificou-se que a capacidade para a produção de coagulase pela bactéria não pode ser concebida como indicativa de enterotoxigenicidade, portanto devem-se considerar os CNS como objeto de importância na epidemiologia das intoxicações estafilocócicas, fazendo-se necessária a atenção com relação à pesquisa dos CNS nos alimentos, uma vez que foram detectados genes responsáveis pela produção de toxinas, e nenhuma das amostras apresentou contagem para Staphylococcus spp. acima do limite permitido pela legislação.(AU)

Antibacterial activity of phytopathogenic Streptomyces strains against bacteria associated to clinical diseases / Atividade antimicrobiana de Streptomyces fitopatogênicas contra bactérias associadas a doenças de importância clínica

The genus Streptomyces is associated with the ability to produce and excrete a variety of bioactive compounds, such as antibiotic, antifungal and antiviral. Biological active polyketide and peptide compounds with applications in medicine, agriculture and biochemical research are synthesized by PKS-I and NRPS genes. The evaluation of the presence of these genes associated with the biosynthesis of secondary metabolites in different phytopathogenic Streptomyces strains were performed using degenerated primers. The positive signal was observed in 58/63 Streptomyces strains for NRPS gene, 43/63 for PKS-I, and for PKS-II all the 63 strains showed positive signal of amplification. These strains also were tested with double layer agar-well technique against bacterial with clinical importance, and it was possible to observe the Streptomyces spp. strains were able to inhibit the growth of 14, 20, 13 and 3 isolates Gram-positive and Gram-negative bacteria, Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Bacillus cereus (ATCC 14579), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) and Escherichia coli (ATCC 11775) respectively. The Streptomyces sp. strains IBSBF 2019 and IBSBF 2397 showed antibacterial activity against all four bacteria-target tested.(AU)

O gênero Streptomyces apresenta alta capacidade de produzir e excretar uma grande variedade de compostos biologicamente ativos, como antibióticos, antifúngicos e antivirais. Compostos biologicamente ativos de policetídeos e peptídeos com aplicações na medicina, agricultura e pesquisas bioquímicas são sintetizados pelos genes PKS-I e NRPS. A avaliação da presença desses genes associados à biossíntese de metabólitos secundários em diferentes linhagens de Streptomyces fitopatogênicas foi realizada através do uso de primers degenerados. O sinal positivo foi observado em 58/63 linhagens de Streptomyces para o gene NRPS, 43/63 para o gene PKS-I e, para o gene PKS-II, todas as 63 linhagens apesentaram o sinal positivo de amplificação. Essas linhagens também foram testadas através da técnica de dupla camada contra bactérias de importância clínica e foi possível observar que as linhagens de Streptomyces spp. foram capazes de inibir o crescimento de 14, 20, 13 e 3 isolados de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Bacillus cereus (ATCC 14579), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) e Escherichia coli (ATCC 11775), respectivamente. As linhagens de Streptomyces sp. ISBSF 2019 e 2397 apresentaram atividade antibacteriana contra todas as bactérias-alvo testadas.(AU)

Causes of equine abortion, stillbirth, and perinatal mortality in Brazil / Causas de abortamento, natimortalidade e mortalidade em equinos no Brasil

Abortion and complications in reproduction are important causes of economic loss in horse breeding. Studies of its causal agents can help to identify the primary pathogens or other factors involved and define appropriate measures to reduce its occurrence. This research aimed to investigate the primary causes of equine abortion, stillbirth, and perinatal mortality in regions of Brazil. Tissue from aborted fetuses, stillbirths, neonates and foals submitted to the Biological Institute of São Paulo, Brazil, from January 2010 to July 2013 were processed for viral and bacterial isolation, polymerase chain reaction (PCR), histology, and immunohistochemistry. Bacterial infection was the primary detected cause of abortion, found in 16 of the 53 animals submitted for bacterial analysis followed by viruses analysis in 2 of 105 animals, and noninfectious causes (neonatal isoerythrolysis) in 2 of 105 animals. Fungi were found in a single sample of 53 tested. The most frequent bacteria recovered were Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, combined E. coli and Streptococcus spp., Staphylococcus spp., and Bacillus spp. The following agents were each observed in a single sample: Arcanobacterium pyogenes, Streptococcus spp., Corynebacterium spp., Actinobacillus spp., and Rhodococcus equi. The predominant identification of fecal and other opportunistic bacteria as opposed to pathogens commonly associated with equine abortion, such as Leptospira spp. and equine herpesvirus type 1 (EHV-1), suggests the need of improving hygiene management of breeding mares to prevent bacterial infection that may cause fetal loss, stillbirth, and perinatal mortality.(AU)

Abortamento e complicações na reprodução são importantes causas de perda econômica na equideocultura. Estudos dos agentes causais podem ajudar a identificar patógenos ou outros fatores envolvidos e definir medidas apropriadas para reduzir sua ocorrência. Esta pesquisa investigou as causas primárias de aborto, natimortalidade e mortalidade perinatal em equinos de diversas regiões do Brasil. Tecidos de fetos abortados, natimortos e potros submetidos ao Instituto Biológico de São Paulo, Brasil, no período de janeiro de 2010 a julho de 2013, foram processados por meio de técnicas de isolamento viral e bacteriano, PCR, histologia e imuno-histoquímica. Infecção bacteriana foi a causa mais detectada, encontrada em 16 de 53 amostras submetidas à análise bacteriana, seguida de causa viral em 2 de 105 amostras, e causas não infecciosas (isoeritrólise neonatal) em 2 de 105 amostras. Fungo foi encontrado em uma única amostra de 53 testadas. As bactérias isoladas mais frequentemente foram Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, E. coli associada a Streptococcus spp., Staphylococcus spp. associado a Bacillus spp. Os seguintes agentes foram observados em uma única amostra cada: Arcanobacterium pyogenes, Streptococcus spp., Corynebacterium spp., Actinobacillus spp. e Rhodococcus equi. A identificação predominante de bactérias fecais e outras bactérias oportunistas, ao invés de outros patógenos comumente associados a quadros de abortamento equino, tais como Leptospira spp. e Herpesvírus equino tipo 1, sugere a necessidade de maior atenção no manejo higiênico das éguas em reprodução, a fim de prevenir infecções bacterianas que possam causar perda fetal, natimortalidade e mortalidade perinatal.(AU)

Occurrence of antibodies against Leptospira spp. in donkeys of São Paulo state / Ocorrência de anticorpos contra Leptospira spp. em asininos no estado de São Paulo

Among the diseases that affect equines, bacterial diseases play an important role from a health and economic point of view, especially leptospirosis and brucellosis. The study aimed to provide information on the occurrence of anti-Leptospira spp. and anti-Brucella abortus antibodies in donkeys of São Paulo state. We found a frequency of 62.4% (53/85) antibodies against Leptospira spp. The donkeys were not seropositive for Brucella spp.(AU)

Entre as doenças que acometem os equídeos, as enfermidades bacterianas assumem um papel importante do ponto de vista sanitário e econômico, destacando-se a leptospirose e a brucelose. O estudo teve como objetivo fornecer informações sobre a ocorrência de anticorpos anti-Leptospira spp. e anti-Brucella abortus em jumentos no estado de São Paulo. Estimou-se que 62,4% (53/85) dos animais apresentavam anticorpos anti-Leptospira spp. Os jumentos estudados não foram sororreagentes contra a Brucella spp.(AU)

Low occurrence of equine herpesvirus 1 (EHV-1) as cause of abortion and perinatal mortality in Brazil / Baixa ocorrência de herpes-vírus equino 1 (HVE-1) como causa de abortamento e mortalidade perinatal no Brasil

Equine herpesvirus type 1 (EHV-1) is an important pathogen that causes abortion, neonatal disease, respiratory disorders, and neurological syndrome in equine populations worldwide. To evaluate EHV-1 as a cause of abortion and perinatal mortality in Brazil, tissue samples from 105 aborted equine fetuses, stillbirths, and foals up to one month of age were examined using virus isolation, immunohistochemistry (IHC), histopathology, and nested polymerase chain reaction (PCR). Two fetuses were positive for EHV-1 by PCR, one of which showed syncytia and eosinophilic intranuclear inclusion bodies in bronchial epithelia, but it was negative by virus isolation. The other showed no characteristic histological lesions, but it was positive by viral isolation. No sample was positive by IHC. The results presented low occurrence of EHV-1 in the studied population and suggested that the use of a combination of techniques increases the likelihood of an accurate diagnosis of EHV-1.

O herpes-vírus equino tipo 1 (HVE-1) é um importante agente patogênico causador de aborto, doença neonatal, distúrbios respiratórios e síndrome neurológica em populações de equinos em todo o mundo. Para avaliar a ocorrência do HVE-1 como agente causal de abortamento e mortalidade perinatal no Brasil, foram examinadas amostras de 105 fetos equinos abortados, natimortos e potros de até 1 mês de idade, utilizando as técnicas de isolamento viral, imuno-histoquímica (IHQ), histopatologia e reação em cadeia da polimerase aninhada (nested-PCR). Dois fetos foram positivos na análise de PCR, e um deles apresentou corpúsculos de inclusão viral eosinofílicos e sincícios no epitélio brônquico, porém foi negativo na análise de isolamento viral. O outro feto não apresentou lesões histológicas características de infecção herpética, mas foi positivo na análise de isolamento viral. Nenhuma amostra apresentou resultado positivo pela análise de IHQ. Os resultados demonstraram baixa ocorrência de HVE-1 na população estudada e que o uso de diferentes técnicas diagnósticas aumenta a probabilidade de um diagnóstico preciso para o HVE-1.

Low occurrence of equine herpesvirus 1 (EHV-1) as cause of abortion and perinatal mortality in Brazil / Baixa ocorrência de herpes-vírus equino 1 (HVE-1) como causa de abortamento e mortalidade perinatal no Brasil

Equine herpesvirus type 1 (EHV-1) is an important pathogen that causes abortion, neonatal disease, respiratory disorders, and neurological syndrome in equine populations worldwide. To evaluate EHV-1 as a cause of abortion and perinatal mortality in Brazil, tissue samples from 105 aborted equine fetuses, stillbirths, and foals up to one month of age were examined using virus isolation, immunohistochemistry (IHC), histopathology, and nested polymerase chain reaction (PCR). Two fetuses were positive for EHV-1 by PCR, one of which showed syncytia and eosinophilic intranuclear inclusion bodies in bronchial epithelia, but it was negative by virus isolation. The other showed no characteristic histological lesions, but it was positive by viral isolation. No sample was positive by IHC. The results presented low occurrence of EHV-1 in the studied population and suggested that the use of a combination of techniques increases the likelihood of an accurate diagnosis of EHV-1.(AU)

O herpes-vírus equino tipo 1 (HVE-1) é um importante agente patogênico causador de aborto, doença neonatal, distúrbios respiratórios e síndrome neurológica em populações de equinos em todo o mundo. Para avaliar a ocorrência do HVE-1 como agente causal de abortamento e mortalidade perinatal no Brasil, foram examinadas amostras de 105 fetos equinos abortados, natimortos e potros de até 1 mês de idade, utilizando as técnicas de isolamento viral, imuno-histoquímica (IHQ), histopatologia e reação em cadeia da polimerase aninhada (nested-PCR). Dois fetos foram positivos na análise de PCR, e um deles apresentou corpúsculos de inclusão viral eosinofílicos e sincícios no epitélio brônquico, porém foi negativo na análise de isolamento viral. O outro feto não apresentou lesões histológicas características de infecção herpética, mas foi positivo na análise de isolamento viral. Nenhuma amostra apresentou resultado positivo pela análise de IHQ. Os resultados demonstraram baixa ocorrência de HVE-1 na população estudada e que o uso de diferentes técnicas diagnósticas aumenta a probabilidade de um diagnóstico preciso para o HVE-1.(AU)

Occurrence of viral diseases in donkeys (Equus asinus) in São Paulo State, Brazil / Ocorrência de enfermidades virais em asininos (Equus asinus) no estado de São Paulo, Brasil

Among the diseases that affect equines, viral diseases play an important role from a health and economic point of view, especially influenza, viral arteritis, herpes infections and vesicular stomatitis. In the Brazilian literature, there is little or no account of the occurrence of infectious diseases in donkeys. Given the importance of donkeys in different activities and the lack of information on infections that may occur in these animals, the aim of this study was to determine the frequency of anti-equine herpesvirus (EHV), anti-equine arteritis virus (EAV), anti-vesicular stomatitis, and anti-equine influenza (H3N8) antibodies in the serum of 85 donkeys bred in some regions of the state of São Paulo. We found the following antibody frequencies: 50.6% (43/85) antibodies against influenza virus subtype H3N8, 47% (40/85) anti-EHV, and 20% (17/85) anti-EAV. The donkeys were not seropositive for vesicular stomatitis. The results suggested that the agents EHV, EAV, and equine influenza subtype H3N8 circulate among donkeys in some regions of the state of São Paulo, Brazil, reinforcing the importance of establishing a routine diagnosis and epidemiological study of this species (AU).

Dentre as doenças que acometem os equídeos, as enfermidades virais assumem um papel importante do ponto de vista sanitário e econômico, especialmente a influenza, arterite viral, as infecções herpéticas e a estomatite vesicular. Na literatura nacional, existe pouco ou nenhum relato sobre a ocorrência de enfermidades infecciosas nos asininos. Tendo em vista a importância dos asininos para diferentes atividades e a falta de informações sobre as doenças que acometem esses animais, este trabalho teve como objetivo estudar a frequência de anticorpos anti-EHV, antivírus da arterite equina, anti-estomatite vesicular e anti-influenza equina (H3N8) em 85 soros de jumentos criados no estado de São Paulo. Estimou-se que 50,6% apresentavam anticorpos contra o subtipo H3N8 do vírus da influenza; 47% (40/85) apresentavam anticorpos contra o EHV e 20% apresentavam anticorpos contra o vírus da arterite. Os jumentos não foram soro reagentes contra a estomatite vesicular. Os resultados obtidos sugerem que os agentes EHV, vírus da arterite equina e influenza equina subtipo H3N8, circulam entre os jumentos do estado de São Paulo, caracterizando a importância do estabelecimento de uma rotina diagnóstica e estudos epidemiológicos na espécie (AU).

Occurrence of viral diseases in donkeys (Equus asinus) in São Paulo State, Brazil / Ocorrência de enfermidades virais em asininos (Equus asinus) no estado de São Paulo, Brasil

Among the diseases that affect equines, viral diseases play an important role from a health and economic point of view, especially influenza, viral arteritis, herpes infections and vesicular stomatitis. In the Brazilian literature, there is little or no account of the occurrence of infectious diseases in donkeys. Given the importance of donkeys in different activities and the lack of information on infections that may occur in these animals, the aim of this study was to determine the frequency of anti-equine herpesvirus (EHV), anti-equine arteritis virus (EAV), anti-vesicular stomatitis, and anti-equine influenza (H3N8) antibodies in the serum of 85 donkeys bred in some regions of the state of São Paulo. We found the following antibody frequencies: 50.6% (43/85) antibodies against influenza virus subtype H3N8, 47% (40/85) anti-EHV, and 20% (17/85) anti-EAV. The donkeys were not seropositive for vesicular stomatitis. The results suggested that the agents EHV, EAV, and equine influenza subtype H3N8 circulate among donkeys in some regions of the state of São Paulo, Brazil, reinforcing the importance of establishing a routine diagnosis and epidemiological study of this species.(AU)

Dentre as doenças que acometem os equídeos, as enfermidades virais assumem um papel importante do ponto de vista sanitário e econômico, especialmente a influenza, arterite viral, as infecções herpéticas e a estomatite vesicular. Na literatura nacional, existe pouco ou nenhum relato sobre a ocorrência de enfermidades infecciosas nos asininos. Tendo em vista a importância dos asininos para diferentes atividades e a falta de informações sobre as doenças que acometem esses animais, este trabalho teve como objetivo estudar a frequência de anticorpos anti-EHV, antivírus da arterite equina, anti-estomatite vesicular e anti-influenza equina (H3N8) em 85 soros de jumentos criados no estado de São Paulo. Estimou-se que 50,6% apresentavam anticorpos contra o subtipo H3N8 do vírus da influenza; 47% (40/85) apresentavam anticorpos contra o EHV e 20% apresentavam anticorpos contra o vírus da arterite. Os jumentos não foram soro reagentes contra a estomatite vesicular. Os resultados obtidos sugerem que os agentes EHV, vírus da arterite equina e influenza equina subtipo H3N8, circulam entre os jumentos do estado de São Paulo, caracterizando a importância do estabelecimento de uma rotina diagnóstica e estudos epidemiológicos na espécie.(AU)

Causes of encephalitis and encephalopathy in brazilian equids

The etiology of diseases that affect the central nervous system (CNS) of equids was investigated. Samples (n = 218) collected from equids showing clinical signs of nervous or behavioral changes were analyzed, of which 37 (17.0%) were positive for rabies, 13 (6.0%) for the presence of protozoans (one Sarcocystis neurona, 12 Toxoplasma gondii), three (1.4%) for equine herpesvirus type 1 myeloencephalopathy, and 24 (11%) for bacterial encephalitis. Histopathology of the CNS revealed one (0.4%) case of cryptococcal myelomeningoencephalitis and 20 (9.2%) cases of equine leukoencephalomalacia. Central nervous system samples were positive for Sarcocystis neurona and Toxoplasma gondii by nested PCR-ITS1 followed by nucleotide sequencing. Diagnosis of equine herpesvirus 1 was confirmed by cell isolation and polymerase chain reaction followed by sequencing of the GD and polymerase (ORF 30) genes in three samples. No case of equine encephalomyelitis was diagnosed in samples analyzed by isolation in mice, VERO cell cultures, and RT-PCR for the nsP1 gene. Bacterial agents (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Bacillus spp., Enterobacteriaceae spp., Corynebacterium spp., and nonfermenting gram-negative bacillus) were detected in pure or preponderant cultures. Diagnosis was conclusive in 45% of samples, indicating that other infectious and noninfectious etiologies of encephalitis and encephalopathy should be considered for investigation.

Alterações na morfologia e na viabilidade no desenvolvimento de embriões bovinos fecundados in vitro com sêmen contaminado experimentalmente à Escherichia coli produtora da toxina Shiga stx2 / Changes in morphology and viability on the development of bovine embryos in vitro fertilized with experimentally contaminated semen to Escherichia coli Shiga toxin producing stx2

O objetivo deste trabalho foi avaliar, por meio de microscopia óptica e eletrônica de transmissão, as alterações na morfologia e a viabilidade do desenvolvimento de embriões bovinos fecundados com sêmen contaminado experimentalmente à Escherichia coli produtora da toxina shiga stx2 (STEC). Para tanto, oócitos foram aspirados de ovários de vacas abatidas e selecionados para maturação in vitro. Após 20-24 horas de maturação, os oócitos foram divididos em 2 grupos. Sendo o primeiro grupo o controle (n = 418), fertilizado com sêmen testado e sem nenhum tipo de contaminante e o segundo, o grupo contaminado (n = 415), fertilizado com sêmen exposto a STEC. Cada sêmen foi tratado pela técnica de gradiente descontínuo de Percoll. Após o período de fecundação, os embriões foram avaliados quanto a sua morfologia e viabilidade, com o auxílio da microscopia óptica e eletrônica. Na ava liação morfológica, os oócitos fecundados com o sêmen contaminado apresentaram retração citoplasmática, falhas na divisão, assimetria de blastômeros, ooplasma granuloso, coloração castanho-escuro, formação de vacúolos, degeneração e rompimento da zona pelúcida. Essas alterações não foram observadas no grupo controle. A avaliação de todos oócitos incluídos mostrou taxas de clivagem de 70,3 e 52,8%, respectivamente, para embriões controle e contaminado (p = 0,0001). Após o 5° dia de desenvolvimento embrionário foram observadas 44,7% de mórulas no grupo controle e 22,4% no grupo contaminado, apresentando diferença significativa (p=0,0001). A presença da STEC interfere na taxa de clivagem dos embriões e também inviabiliza e provoca queda no desenvolvimento embrionário ao estádio de mórula, além de causar alterações morfológicas durante esse desenvolvimento.(AU)

The objective of this study was to evaluate by optical microscopy and transmission electron, changes in morphology and viability of the development of bovine embryos, fertilized with semen experimentally contaminated (STEC). Oocytes were aspirated from ovaries of slaughtered cows and the intact zona pellucida were selected and matured. After 20-24 hours of maturation, the oocytes were divided into 2 groups. The first, control group (n = 4l8),fertilized with semen tested and without any type of contaminant and the second, the infected group (n = 415), fertilized with sperm exposed to STEC. Both semen were treated by the technique of discontinuous Percoll gradient. After the period of fertilization, embryos were evaluated for their morphology and viability by optical and electron microscopy. In morphologic evaluation, the oocytes fertilized with contaminated semen showed cytoplasmic shrinkage, gaps in the division, asymmetry of blastomeres, ooplasm grainy, dark brown color, vacuoles formation, degeneration and zona pellucid disruption. These changes were not observed in the control group. The cleavage rate was 70.3 and 52.8%, respectively, for control and infected groups, significant differences (p = 0.0001). After the 5th day of embryonic development, where it was observed 44.7% of morula in the control group, and 22.4% in the contaminated group, showing a significant difference (p = 0.0001). The presence of STEC interferes with the cleavage rate of embryos and also prevents and causes a decline in embryonic development to the morula stage and cause morphological changes during this development.(AU)

Diagnostic comparison of Corynebacterium pseudotuberculosis through microbiological culture and PCR in sheep samples / Comparação diagnóstica de Corynebacterium pseudotuberculosis pelo cultivo microbiológico e PCR em amostras ovinas

Caseous lymphadenitis is a chronic infectious disease caused by Corynebacterium pseudotuberculosis , which is a bacterium responsible for a great number of economic losses on goat and sheep production. It is characterized by the formation of abscesses in superficial lymph nodes and in internal organs and lymph nodes. This study aimed at determining the agreement between microbiological culture and PCR in the identification of C. pseudotuberculosis , in samples collected from animals in slaughterhouses and in animals that presented lymph node enlargement in field conditions. From the 202 samples analyzed through microbiological culture, 113 (56%) were positive for Corynebacterium sp.; from these positive samples, 38 (34%) were identified as C. pseudotuberculosis by microbiological culture. From the amount of samples, 110 (54%) were positive and 92 (46%) were negative in the PCR. Kappa index (0.193) presented a weak agreement between PCR and microbiological culture. We concluded that molecular diagnosis (PCR) in clinical samples proved to be more efficient, reproducible, and faster than the microbiological culture, both on clinical samples analyses and in the confirmation of C. pseudotuberculosis in colonies that were classified by Corynebacterium genus. Thus, the present study demonstrated the importance of PCR to confirm C. pseudotuberculosis diagnosis, and the best contribution for the epidemiological surveillance of the disease in sheep.(AU)

A linfadenite caseosa é uma doença infectocontagiosa crônica, causada pelo agente etiológico Corynebacterium pseudotuberculosis , que é uma bactéria responsável por grandes perdas econômicas na produção de ovinos e caprinos. Caracteriza-se pela formação de abscessos em nódulos linfáticos superficiais e em órgãos internos e linfonodos. O presente trabalho teve por objetivo verificar a concordância entre as metodologias de isolamento microbiológico com a PCR na identificação do C. pseudotuberculosis , em amostras clínicas colhidas em abatedouros e em animais que apresentavam aumento de linfonodo em condições de campo. Das 202 amostras analisadas no cultivo microbiológico, 113 (56%) foram positivas para o gênero Corynebacterium sp., e 38 (34%) colônias foram identificadas como C. pseudotuberculosis por meio de cultura microbiológica. Das amostras clínicas extraídas, 110 (54%) foram positivas e 92 (46%) foram negativas na PCR. A concordância estimada entre as técnicas de PCR e o cultivo microbiológico pelo indicador Kappa foi considerada fraca (0,193). Concluímos que o diagnóstico molecular (PCR) provou ser mais eficiente, rápido e com reprodutibilidade quando comparado ao cultivo microbiológico das amostras clínicas bem como da confirmação do C. pseudotuberculosis de colônias pertencentes ao gênero Corynebacterium . Dessa forma, o presente trabalho demonstrou a importância do uso da PCR na confirmação diagnóstica do C. pseudotuberculosis , visando contribuir com a melhoria da vigilância epidemiológica da doença em ovinos.(AU)

Prevalência de anticorpos contra Toxoplasma gondii em ovinos no município de Uberlândia, MG / Prevalence of anti-Toxoplasma gondii antibodies in sheep in Uberlândia municipality, MG

O objetivo do estudo foi verificar a prevalência de anticorpos contra Toxoplasma gondii em 334 amostras de sangue de ovinos oriundos de 12 propriedades localizadas no município de Uberlândia, Minas Gerais. O teste utilizado para a pesquisa foi a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com ponto de corte na diluição 1:64. Identificou-se a prevalência de 30,8% anticorpos anti-T. gondii em ovinos e a frequência de soropositivos por propriedade variou de 10 a 66,7%, sendo que todas as propriedades apresentaram pelo menos uma amostra reagente. Ao associar a soropositividade com sexo, idade e raça, observou-se diferença estatística significativa para faixa etária, de modo que os animais com menor idade (6 a 11 meses) foram menos reagentes do que os ovinos com maior idade. Esses resultados sugerem a adoção de medidas preventivas na região estudada.(AU)

The aim of this study was to verify the prevalence of anti-Toxoplasma gondii antibodies in 334 blood samples of sheep from 12 properties located in Uberlândia municipality, Minas Gerais, Brazil. The indirect immunofluorescence assay test (IFAT) was used for the detection of anti-T. gondii antibodies, with a cut-off at dilution 1:64. The prevalence of anti-T. gondii antibodies in sheep was 30.8% and seropositive frequency per property ranged from 10 to 66.7%, and all properties have at least one reacted sample. When ovine seropositivity was associated with gender, age and breed, there was a statistically significant difference for age, so that animals with lower age (6 to 11 months) were less reacted than the older sheeps. These results suggest the adoption of preventive measures in the region studied.(AU)

Inquérito sorológico da infecção pelos vírus da encefalomielite equina no estado de Minas Gerais, Brasil / Serological survey of equine encephalomyelitis virus infection in the state of Minas Gerais, Brazil

Foi investigada a ocorrência da infecção pelos vírus da Encelafalomielite Equina do Leste (EEE), Encefalomielite Equina do Oeste (WEE) e Encefalomielite Equina Venezuelana (VEE) em equídeos não vacinados contra tais agentes, criados em dez delegacias regionais do estado de Minas Gerais (Almenara, Bambuí, Curvelo, Governador Valadares, Montes Claros, Oliveira, São Gonçalo do Sapucaí, Teófilo Otoni, Unaí e Viçosa), empregando-se a técnica de soroneutralização em microplacas. Dos 826 animais examinados, 30,2% ((250/826) foram soropositivos para EEE e 1,9% (16/826) para o zuelano de Encefalomielite Equina circulam na população equina do estado de Minas Gerais.

The occurrence of Equine Eastern Encephalomyelitis (EEE), Equine Western Encephalomyelitis (WEE) and Equine Venezuelan Encephalomyelitis (VEE) virus infection was investigated in equids not vaccinated against these viruses. The animals were distributed in ten regional districts of the state of Minas Gerais (Almenara, Bambuí, Curvelo, Governador Valadares, Montes Claros, Oliveira, São Gonçalo do Sapucaí, Teófilo Otoni, Unaí e Viçosa). Microplate serum neutralization test was used to detect antibodies against encephalitis virus. Two hundred and fifty animals (30.2%, 250/826) were EEE-seropositive, while 1.9% of them (16/826) were VEE-seropositive. No animals were found to be seropositive for WEE. In conclusion, either EEE or VEE viruses circulate in the equid population of the state of Minas Gerais.

Inquérito sorológico de lentiviroses de pequenos ruminantes (Maedi-Visna e artrite-encefalite caprina) no estado de São Paulo / Serologic survey of small ruminants lentiviruses (Maedi-Visna and caprine arthritis-encephalitis) in São Paulo state

O objetivo deste estudo foi determinar a frequência de animais soropositivos ao vírus da Maedi-Visna (MVV) em ovinos e ao vírus da CAE (CAEV) em caprinos criados no estado de São Paulo. Na pesquisa dos anticorpos séricos anti- MVV e anti-CAEV foi utilizada a técnica de imunodifusão em gel de ágar (IDGA). Dentre os ovinos estudados, 0,3% (4/1235) eram sororreagentes ao MVV e 15,1% caprinos (30/199) ao CAEV. Foi realizada a análise de fatores de risco associados à condição de propriedade positiva para CAEV e Maedi-Visna. Foram selecionadas variáveis para as duas enfermidades, no entanto, quando essas variáveis foram usadas na regressão logística múltipla, não foram identificados fatores de risco para as infecções. A infecção pelo CAEV no estado de São Paulo tem uma ampla disseminação e com uma alta prevalência enquanto que o MVV apresenta baixa prevalência. Ressalta-se a importância de medidas de prevenção e controle para diminuir a ocorrência da CAE e evitar a disseminação da Maedi-Visna.

The aim of this study was to carry out the serological occurrence of Maedi-Visna virus (MVV) and CAE virus (CAEV) in ovines and caprines breeding in São Paulo state. The test to detect MVV and CAEV antibodies was agar gel immunodiffusion (AGID). The detection of antibodies against MVV was 0,3% (4/1235) and against CAEV was 15,1% (30/199). Was carried analysis of risk factors associated with the presence of positive property for CAEV and Maedi-Visna. Variables were selected for both diseases, however, when these variables were used in multivariate logistic regression model were not identified risk factors for the infections. The CAEV infection in the São Paulo state has a wide spread and a high prevalence while MVV has low prevalence. It emphasizes the importance of prevention and control measures to reduce CAEV occurrence and prevent the spread of Maedi-Visna.

Comparative study on PCR and microbiological culture performance for identifying Mycobacterium tuberculosis complex and Mycobacterium bovis specie in bovine samples

The present study aimed at evaluating the concordance between PCR and microbiological culture techniques for analysing organs samples from cattle with suspected lesions of tuberculosis. Fifty-twosamples collected from slaughter houses were analyzed by microbiological culture, and the extracted DNA was amplified by PCR using NZ1 and NZ2 primers. These primers identify the mycobacteria belongingto M. tuberculosis complex, and the primers pair pncA differentiate the M . bovis from M. tuberculosis species. The colonies isolated from 30 samples were suspended, and the extracted DNA was amplifiedby PCR using the same primer pairs. Although the agreement has been considered weak (k = 0.175) between microbiological culture and PCR performed directly in clinical samples using NZ1 and NZ2 primers, the two pairs of primers could amplify the target genes when 100% of the extracted DNA from 30 isolated colonies were used. Thus, PCR employing pncA primer pair enabled to identify M.bovis in the isolated colonies at a short time when compared with the biochemical assays. The concomitant use of PCR and bacteriologic culture techniques hastens the confirmation of detected agent, which is essential inconducting the epidemiological studies and in taking preventive control measures.

Prevalence of Neospora caninum antibodies in sheep flocks of Uberlândia county, MG.

Neosporosis is a parasitic disease that occurs in sheep and is associated with reproductive failure. The aim of this study was to verify seroprevalence of Neospora caninum antibodies in 12 sheep flocks in Uberlândia county, Minas Gerais, Brazil, using Indirect Immunofluorescence Assay (IFA). A total of 334 sheep blood samples were analyzed and an epidemiologic questionnaire was applied for each farm in order to correlate with risk factors of neosporosis: gender, age, breed, abortion problems, contact with cattle and dogs, and presence of wild canids. The prevalence of Neospora caninum antibodies in sheep was 8.1%, with titers ranging from 50 to 3200 and 83.3% of farms detected at least one ovine reactive. There was statistically significant difference in flocks with abortion problems associated with the presence of Neospora caninum antibodies (p < 0.05).

Prevalence of Neospora caninum antibodies in sheep flocks of Uberlândia county, MG / Prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em rebanhos de ovinos do município de Uberlândia, MG

Neosporosis is a parasitic disease that occurs in sheep and is associated with reproductive failure. The aim of this study was to verify seroprevalence of Neospora caninum antibodies in 12 sheep flocks in Uberlândia county, Minas Gerais, Brazil, using Indirect Immunofluorescence Assay (IFA). A total of 334 sheep blood samples were analyzed and an epidemiologic questionnaire was applied for each farm in order to correlate with risk factors of neosporosis: gender, age, breed, abortion problems, contact with cattle and dogs, and presence of wild canids. The prevalence of Neospora caninum antibodies in sheep was 8.1 percent, with titers ranging from 50 to 3200 and 83.3 percent of farms detected at least one ovine reactive. There was statistically significant difference in flocks with abortion problems associated with the presence of Neospora caninum antibodies (p < 0.05).

A neosporose é uma doença parasitária que acomete os ovinos e está associada a perdas reprodutivas. O objetivo deste estudo foi verificar a prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em 12 rebanhos de ovinos do município de Uberlândia, MG, utilizando a Técnica de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Foram analisadas 334 amostras de sangue e, em cada propriedade, aplicou-se um questionário epidemiológico para avaliar os fatores de risco envolvidos na transmissão desse protozoário: sexo, idade, raça, problemas de aborto, contato com bovinos e caninos e presença de canídeos silvestres. A prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em ovinos foi de 8,1 por cento, com títulos variando de 50 a 3200 e 83,3 por cento das propriedades apresentaram pelo menos um ovino reagente. Houve diferença estatística significativa para rebanhos com problemas de aborto associados à presença de anticorpos anti-Neospora caninum (p < 0,05).

Ocorrência de leucoencefalomalácia (LEME) em equídeos no estado de São Paulo, Brasil: achados anatomopatológicos / Occurrence of leukoencephalomalacia in equids in São Paulo state, Brazil: anatomopathological findings

O trabalho relata a ocorrência de leucoencefalomalácia em equídeos (LEME) com sintomatologia nervosa e com diagnóstico negativo para raiva, herpesvírus equino e encefalomielite equina durante o período de dois anos, no Estado de São Paulo, Brasil. Foram examinadas 67 amostras de sistema nervoso central e em 10,4% (cinco equinos, um pônei e um asinino) observaram-se lesões macroscópicas de LEME, confirmadas pela análise histopatológica. Os animais acometidos eram cinco machos e duas fêmeas, com idades que variavam de 11 meses a nove anos. Os sete casos ocorreram tanto no inverno como em outras estações do ano. As principais manifestações clínicas relatadas foram incoordenação, ataxia, paralisia dos membros posteriores, profunda depressão, levando ao óbito. Macroscopicamente, observaram-se congestão dos vasos meníngeos, áreas de malácia da substância branca, caracterizadas por coloração amarelada e/ou hemorrágica, com cavitação e amolecimento circundados por hiperemia. As lesões microscópicas observadas em todos os casos eram de necrose de liquefação da substância branca do cérebro, caracterizada por substância eosinofílica amorfa e homogênea, presença de edema axonal e perivascular, hemorragia e vacuolização do neurópilo adjacente e esferoides axonais. Em algumas áreas de malácia havia também células Gitter. Em apenas um animal observou-se manguito perivascular mononuclear. O presente trabalho confirma que o diagnóstico diferencial é importante na distinção da LEME com outras neuropatias encefálicas que acometem equídeos. A ocorrência da LEME relatada neste estudo demonstra que esta enfermidade é importante para a equideocultura do Estado de São Paulo.

This article describes clinical and pathological findings of leukoencephalomalacia in equids with neurological signs which tested negative to rabies, equine herpesvirus and equine encephalomyelitis. This work was carried during the period of two years in São Paulo State, Brazil. A total of 67 brain samples were examined and in 10.4% (five equines, one poney, and one donkey) were observed gross lesions of ELEM, confirmed by histopathological analysis. The animals were five males and two females ranged from 11 months to nine years old. The seven cases happened in all seasons of the year. The most characteristic clinical signs were incoordination, ataxia, paralysis of the hind legs, profound depression and death. Necropsy was performed to collect brain samples for virological and histopathological diagnosis. Gross lesions included congestion of meningeal blood vessels, malacia of the white matter characterized by yellowish depressed areas sometimes hemorrhagic, with cavitations, and softening surrounded by hyperemic area. Microscopically, the lesions were liquefactive necrosis of the white matter brain, characterized by eosinophilic and amorphous material, axonal and perivascular edema, hemorrhage and vacuolization of the neuropil and axonal sferoids. Gitter cells were seen in some areas of malacia. Perivascular mononuclear cuffing was observed in only one case. The present study confirms that differential diagnosis is very important to distinguish equid neuropathies. The occurence of ELEM in the present study shows that the disease is important for the equideoculture in São Paulo State.